cDNA第一链合成RNA逆转录试剂盒说明书

货号：A2010A0604(10ul*40T)， A2010A0601(10ul*100T), A2010A0603(10ul*400T)；

试剂组成（请将试剂盒储存于-20度）

产品介绍

cDNA 第一链合成试剂盒包括了一种全新高效逆转录酶、反应缓冲液及该实验中必需的反应组分。使用该试剂盒能够以总RNA 或mRNA 为模板高效逆转录成互补的cDNA 第一链，进而开展后继的相关实验。

试剂盒可逆转录0.1至10 μg 的总RNA每20 μL逆转录体系，我们推荐1-2 μg的总RNA每20 μL逆转录体系；

合成的cDNA模板用于定量PCR，cDNA模板可在-20℃条件下保存一年。

产品使用限制

1 本产品只用于分子生物学研究。其不应用于诊断、预防和治疗疾病。在使用本产品时应遵从相应的注意事项；

2 本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性，勿直接接触皮肤或吞咽；

3 操作时请穿戴实验服和手套，如接触皮肤，应立即用大量清水冲洗；

4 误食或其他危急情况，请及时到医院就治；

5 部分试剂易燃，请注意消防安全。

客户自备设备和试剂

1 已制备的总RNA样本；

2 0.6mL及1.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free；货号A2010B0X04）；

3 RNase-free Tips（1000μL、200μL的枪头；货号A2010B0X09）；

4 移液器（200μL，1000μL）；

5 恒温水浴锅或金属浴，冰浴盒；

6 12000g冷冻离心机；

操作说明

1 提前将试剂盒中试剂及总RNA样本放置冰浴，温度平衡至冰点；

2 震荡混匀所有试剂及总RNA样本并瞬时离心；

3 在每个0.6 mL Rnase-free Eppendorf管中加入1-2 μg的总RNA样本；

4 每管加入0.8 μl OligoDT以及1.6 μL随机引物GPR-6，补充适量的DEPC水至总体积达10 μL；（如所有样本RNA量相近，无需通过体积调整RNA量均一，这步也可计算配制总管预混后分装）

5 震荡混匀后瞬时离心；

6 恒温金属浴70℃温育5 mins，冰浴备用；

7 按下表配置RT反应液，震荡混匀；

下表为1份样本的量，如需要逆转录n份的RNA，请配置n+1份进行分装：

8 在冰浴后的每个离心管中加入RT反应液10 μL，此时离心管内总体积为20 μL：

9 震荡混匀后瞬时离心；

10 恒温金属浴中42℃反应60 mins；

11 cDNA产物应置于-20℃保存。

注意事项

1 本试剂盒可逆转录合成体系为20 μL的cDNA样本，如需要加大体系，可等比增加加入试剂量；（例：合成100 μL的cDNA，所有试剂加入量乘以5倍）

2 本试剂盒试剂额外损耗相对较大，建议客户根据自身样本数量订购相应规格的试剂盒，以免出现试剂浪费或不足现象；

3 总RNA量建议大于100 ng，以保证cDNA得率；

4 样本中建议避免有机物或酚污染，以保证逆转录效率；

5 M-MLV和Recombinant Rnasin含有甘油，在-20℃条件下是液体，保存时间为1年，避免保存在-80℃导致反复冻融，避免在常温下保存的时间过久影响效价；

6 得到的cDNA产物建议直接用PCR 或者Real Time PCR进行内参验证。

技术支持

BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。我们的技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难，请联系我们，无需迟疑。

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