三、BioTNT QPCR microRNA 样本准备  

3.1 组织样本准备

  注意：BioTNT QPCR microRNA 检测的样本取样同Real time PCR的组织取样与保存：

1、 取动物的组织，动作要求迅速，尽量避免样本在环境中暴露太久；

2、 讲样本迅速放入无菌无酶的冻存管中，为保证质量，推荐选取Axygen，corning，nunc等国外品牌的冻存管；根据组织块的大小，确定RNA 抽提方式；如果组织块非常小，建议采用柱抽提试剂盒进行抽提，此时样本中不要加入trizol；如果组织块有100mg，可以采用trizol 法抽提总RNA的方式（RNA提取试剂盒(Trizol 法) A2010B0A01），进行样本的保存，在样本中加入1ml trizol 浸没样本；

3、 在冻存管上做好标记，尽量清晰易辨；在实验记录本上做好记录，尽量详细易查；

4、 将冻存管直接放入液氮中速冻；或加入1ml Trizol 到冻存管中，再放入液氮速冻；

5、 速冻2h 后，将冻存管从液氮转至-80度冰箱，可以保存6个月左右；

BioTNT QPCR microRNA 的细胞取样与保存

1、 悬浮细胞：500g 离心5min 取细胞，用PBS 清洗2-3遍，得细胞，并转至放入冻存管中；

2、 根据细胞量进行后续抽提方式的选择，如果细胞量大于5*10的5次方，可以采用trizol 方式进行总RNA 抽提，如果小于此量，建议采用柱式抽提；可以采用trizol 抽提的客户，可在样本中加入500ul Trizol 到冻存管中，吹打混匀（RNA提取试剂盒(Trizol 法) A2010B0A01）；

3、 在冻存管上做好标记，尽量清晰易辨；在实验记录本上做好记录，尽量详细易查；

4、 将冻存管放入液氮速冻，2h 后，转至-80度冰箱，可以保存6个月左右；

样本运输：干冰运输

3.3   血清/血浆样本准备：

建议采用血浆样本，可以得到相对更好的实验结果。

使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g离心10分钟，分离血浆和细胞组分。（注意：血浆收集应使用抗凝管，抗凝剂可以用柠檬酸钠或EDTA等，但一定不要使用肝素抗凝，因为肝素对后续实验有较大影响。）将采集好的血浆转移至单独的冻存管，按照每400-500ul/管分装好。短期保存，可放入-20℃或-70℃冰箱。长期保存，请放入液氮。

3.4   全血样本准备：

请按照实际使用的收集方法，如注射器收集或真空收集管等，参考相应的厂商提供产品说明进行操作。采集好全血，将采集好的全血转移至单独的冻存管，按照每500ul/管分装好。短期保存，可放入-20℃或-70℃冰箱。长期保存，请放入液氮。

3.5   石蜡样本准备：

石蜡切片，至少三片；或者提供石蜡块，常温保存。